Monthly Archives for 四月 2012

RT-PCR实验方法总结

RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。简言之,RT-PCR实验主要有三步:抽提RNA,RT,PCR。但要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存在,不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。

13. 四月 2012 by admin
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引物合成介绍及常见问题

我们在做PCR(聚合酶链式反应)时,最关键的环节之一就是设计合适的引物对。引物的设计合成也是PCR中涉及问题最多的一环。鉴于引物设计合成的重要性,我们对可能遇到的问题进行了总结。包括,1. 引物是如何合成的?固相亚磷酰胺三酯法。2.引物纯化方式有哪些,如何选择?脱盐、OPC、PAGE、HPLC等。3.引物的OD数如何定量?定量不准是怎么回事儿?根据实验需要,确定订购引物的纯度级别。……本文是一篇抛砖引玉文,所有上述问题详解 http://gmo.cnbabyup.com/synthetic-primers-introduce-and-frequently-asked-questions/

01. 四月 2012 by admin
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